A 36 éves játékos 1995-ben igazolt a Milanhoz, amelyet – a Vicenzánál kölcsönben eltöltött egy szezont leszámítva – tizenhét idényen át erősített, sőt Paolo Maldini visszavonulása után, 2009-ben megkapta a csapatkapitányi karszalagot is.
Ambrosini a milánóiak játékosaként négyszer nyert bajnokságot, kétszer olasz Szuperkupát, európai Szuperkupát és Bajnokok Ligáját, valamint egyszer Olasz Kupát és klubvilágbajnokságot, míg az olasz válogatott tagjaként egy Európa-bajnoki ezüstérem fűződik a nevéhez.
„A Milan és Ambrosini útjai különválnak. Ha Christian Abbiati beleegyezik, akkor a következő csapatkapitányunk Riccardo Montolivo lesz” – nyilatkozta Adriano Galliani.
Arról egyelőre nincs információ, hogy a 35-szörös válogatott játékos hol folytatja (egyáltalán folytatja-e) a pályafutását.